Construction of anti-CD38 CAR-T cells with targeted inhibition of CD38 by shRNA and preliminary identification of its functions
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2022.01.002
- VernacularTitle:shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞构建及其功能的初步鉴定
- Author:
LIU Xiuying1
1
,
2
;
FENG Yaru1
1
,
2
;
ZHOU Yating1
1
,
2
;
WANG Jianxun1,2
1
,
2
Author Information
1. School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China;
2. Research Institute of Shenzhen, Beijing University of Chinese Medicine, Shenzhen 518118, Guangdong, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
淋巴瘤；多发性骨髓瘤；CD38；嵌合抗原受体；T细胞；RNA干扰
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2022;29(1):11-17
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：探讨shRNA靶向抑制CD38的方法能否增强抗CD38 CAR-T细胞的抗癌功能。方法：构建shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞的CAR分子，利用逆转录病毒载体包装成功后转导人原代T细胞，制备CAR-T细胞。实验分为shRNA1 CD38 CAR-T组、shRNA2 CD38 CAR-T组和对照组（shR-NC-CD38 CAR-T细胞）。采用qPCR法检测CAR-T细胞CD38 mRNA相对表达水平，计算CAR-T细胞培养0～14 d的增殖倍数，CFSE法检测CAR-T细胞与人Burkitt淋巴瘤细胞Raji-luc或人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞RPMI-8226-luc共培养时的增殖情况，荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比（1∶1、1∶2、1∶4、1∶8）时对Raji-luc和RPMI-8226-luc细胞的杀伤效率，ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-8226-luc细胞时上清液中IFN-γ水平，FCM检测CAR-T细胞表面耗竭T细胞生物标志物PD-1的表达水平。结果：shR-NC-CD38 CAR、shRNA1-CD38 CAR和shRNA2-CD38 CAR逆转录病毒载体的滴度均为1´107拷贝/mL，转导T细胞后，shR-NC-CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T细胞的转导效率（CAR的阳性率）分别为60.3%、67.0%和57.4%。与对照组比较，shRNA2-CD38 CAR-T组细胞中CD38 mRNA的表达水平显著降低（P<0.01），显示shRNA-CD38 CAR-T细胞构建成功。shRNA2-CD38 CAR-T组细胞在体外培养增殖能力更强（P<0.05），对2种CD38阳性的肿瘤细胞的杀伤效率更高（均P<0.05）、IFN-γ释放水平更高（均P<0.05）、细胞表面PD-1的表达水平更低（P<0.05）。结论：成功构建一种shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞，其抗癌功能表现出明显的优势。
- Full text:20220102.pdf
