Preparation of selenized hyaluronic acid hydrogel loaded with BMSC-derived nanovesicles and investigation of its cytotoxic effect on glioma GL261 cells
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2025.03.003
- VernacularTitle:负载BMSC来源纳米囊泡的硒化透明质酸水凝胶的制备及其对胶质瘤GL261细胞的杀伤作用
- Author:
ZHANG Zhuanzhuan1, 2△
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ZHOU Xuan2, 3△
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CHEN Cuimin2, 4
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ZHANG Tinglin2, 4
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GAO Jie2, 4
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Author Information
1. Institute of Translational Medicine, Shanghai University,Shanghai 200444, China;
2. Clinical Research Unit, the First Affiliated Hospital of Naval Medical University, Shanghai 200433, China;
3. College of Pharmacy, Henan University, Zhengzhou 475004, Henan, China;
4. Key Laboratory of Marine Medicine and Drug Transformation, the First Affiliated Hospital of Naval Medical University, Shanghai 200433, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
胶质瘤；纳米囊泡；GL261细胞；声动力疗法；吲哚菁绿；复合水凝胶
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2025;32(3):247-256
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：构建纳米囊泡杂化透明质酸水凝胶（ICG-NV@SeHA）并探讨其联合声动力疗法（SDT）杀伤小鼠胶质瘤GL261细胞的机制。方法：通过挤出法制备骨髓来源的间充质干细胞纳米囊泡（BMSC-NV），再将吲哚菁绿（ICG）掺入其中制备ICG-NV。在EDC存在下用ED对HA进行氨基化，合成AHA，进一步通过亲核加成反应与γ-硒代丁内酯（SBL）连接，合成SeHA。将AHA、ICG-NV和SBL溶液混合，发生氧化交联获得ICG-NV@SeHA，对其进行物理表征。用DiD标记ICG-NV和ICG-NV@SeHA后与GL261细胞共培养12 h，观察细胞内吞情况。用CCK-8法检测ICG-NV和ICG-NV@SeHA与GL261细胞和小鼠海马神经元HT22细胞的生物相容性。将GL261细胞分为PBS + 超声处理（US）、ICG + US、IVG-NV + US和ICG-NV@SeHA + US组，Calcein-AM/PI染色法和DCFH-DA荧光探针标记法分别检测联合SDT对GL261细胞杀伤作用，以及对细胞内活性氧（ROS）生成的影响；采用细胞免疫荧光实验检测对细胞表面钙网蛋白（CRT）表达的影响，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测对细胞高迁移率族蛋白1（HMGB1）和三磷酸腺苷（ATP）释放的影响。结果：成功制备BMSC-NV，粒径约154.3 nm；ICG成功被包入囊泡中，包封率为40.6%；氨基成功连接在HA上，接枝率为32.5%。最后成功制备了ICG-NV@SeHA，透射电镜观察显示其具有疏松的多孔结构，流变结果储能模量（G’）＞损耗模量（G”），均符合水凝胶特性，且具有剪切变稀特性。细胞实验结果显示，ICG-NV可以被GL261细胞有效摄取。CCK-8实验和Calcein-AM/PI荧光染色实验结果显示，ICG-NV和ICG-NV@SeHA均具有良好的生物相容性，对GL261和HT22细胞没有明显的细胞毒作用；而ICG-NV + US和ICG-NV@SeHA + US组细胞存活率较ICG+US组显著降低（P < 0.01或P < 0.001）。ICG-NV + US和ICG-NV@SeHA + US组细胞DCFH-DA探针绿色荧光强度显著高于PBS、PBS + US和ICG + US组（P < 0.000 1或P < 0.001），反映细胞内产生大量的ROS，且细胞表面CRT表达显著增加（P < 0.000 1），上清液中HMGB1和ATP的释放也增多（P < 0.05或P < 0.01）。结论：成功制备具备优异的机械性能和可注射性的ICG-NV@SeHA，生物相容性好，联合SDT能有效杀伤GL261细胞并诱导免疫原性细胞死亡（ICD），可能成为一种有效治疗胶质瘤术后复发的新手段。
- Full text:202505140959209246720250303.pdf
