[摘 要] 目的：探究乌头酸酶2（ACO2）发生核转位的条件和作用机制并探讨ACO2核转位对肝癌细胞PLC/PRF/5增殖、迁移和侵袭的影响。方法：借助Human Protein Atlas（HPA）数据库分析ACO2在人肝癌组织中的表达与亚细胞定位；利用NLStradamus网站预测ACO2的潜在核定位信号（NLS），并通过基因截短技术构建NLS缺失的ACO2基因（ACO2 ∆NLS）；将野生型（ACO2WT）及突变型（ACO2ΔNLS）质粒转染至人肝癌PLC/PRF/5细胞，分别在常氧及低氧（1% O₂）条件下培养；采用免疫荧光染色技术，分析低氧条件影响ACO2入核的机制；通过EdU染色、划痕实验及Transwell实验评估PLC/PRF/5细胞的增殖、迁移与侵袭能力；借助WB检测胞核和胞质中ACO2的表达水平以及迁移、侵袭相关蛋白MMP2与MMP9表达水平的变化。结果：HPA数据库分析显示，ACO2在肝癌细胞的细胞核和细胞质中均呈高表达；免疫荧光染色和WB结果显示，低氧能够以NLS依赖的方式显著诱导ACO2发生核转位（均P < 0.01）；功能学实验显示，低氧诱导的ACO2核转位能进一步显著促进PLC/PRF/5细胞的增殖、迁移（均P < 0.05）和侵袭（均P < 0.05）能力。WB实验表明，ACO2核转位可上调迁移、侵袭相关蛋白MMP2与MMP9的表达水平（均P < 0.05）。结论：低氧能以NLS依赖的方式诱导ACO2发生核转位，从而增强PLC/PRF/5细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

[摘 要] 目的：探究抗程序性死亡受体1（PD-1）免疫治疗对非小细胞肺癌（NSCLC）恶病质患者预后的影响。方法：以2019年1月—2021年1月在西京医院治疗的80例恶病质NSCLC患者为研究对象，用随机数字表法将其分为对照组和观察组，对照组给予序贯放化疗等对症治疗及营养治疗，观察组给予抗PD-1抗体免疫治疗联合治疗。比较两组临床疗效及治疗后身体状况改善情况，并观察患者治疗前后肺功能及免疫功能情况，在患者治疗后对其生存情况进行随访，统计两组患者治疗后1年累计生存率。结果：治疗后两组NSCLC患者的疾病控制率（DCR）及客观缓解率（ORR）对比均无明显差异（均P > 0.05）；观察组食欲评分及Karnofsky评分（KPS）均高于对照组（均P < 0.05）；治疗后观察组CD3+及CD4+/CD8+淋巴细胞亚群比例明显高于对照组（均P < 0.05），第1秒用力呼气容积（FEV1）及FEV1/用力肺活量（FEV1/FVC）比值均大于对照组（均P < 0.05）；观察组治疗后1年生存率[62.50%（25/40）]明显高于对照组[40.00%（16/40）]（P < 0.05）。结论: 抗PD-1抗体免疫治疗可减轻NSCLC恶病质患者免疫功能及肺功能损害，并能提高其1年生存率。

目的：通过向C57Bl/6J小鼠腹腔注射IFN-γ腺病毒（Ad-mIFN-γ）建立细胞因子释放综合征（CRS）的动物模型。方法：构建Ad-mIFN-γ及对照Ad-lacZ腺病毒载体，分别以MOI=100体外转染小鼠腹腔巨噬细胞，流式细胞术检测其对细胞mIFN-γ分泌的影响。将40只雌性C57Bl/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、载体对照组、病毒低、中、高剂量组（每组8只），分别向各组小鼠腹腔注射PBS（200 μL）、Ad-lacZ（2×107 PFU/只）、Ad-mIFN-γ（5×106 PFU/只）、Ad-mIFN-γ（1.5×107 PFU/只）和Ad-mIFN-γ（2×107 PFU /只）。每日观测小鼠的体质量及生存情况；第3天时采用流式细胞术检测小鼠外周血和脾内单核细胞（CD11b+）、巨噬细胞（CD11b+/CD86+）比例，免疫荧光染色法检测脾内CD11b+的单核细胞比例；第9天时采用流式细胞术检测小鼠血清中细胞因子的分泌水平；第14天，采用颈椎脱臼法处死小鼠，H-E染色法观察小鼠肝、脾、肺和肾的病理和组织学变化。结果： Ad-mIFN-γ体外感染小鼠腹腔巨噬细胞，在第3天检测到巨噬细胞分泌mIFN-γ达到峰值（118.34±2.90）pg/mL，并在一周内持续高分泌mIFN-γ，Ad-lacZ对照组IFN-γ分泌水平较低后，第3天时为（0.17±0.08）pg/mL。小鼠腹腔注射Ad-mIFN-γ后，在14 d内病毒低、中剂量组无小鼠死亡，病毒高剂量组小鼠体质量持续减轻（P<0.001）；第3天，病毒高剂量组小鼠外周血和脾组织内单核细胞、巨噬细胞比例较对照组和中剂量组均显著增加（P<0.05或P<0.01）；第9天，病毒低、中、高剂量组小鼠血清中mIFN-γ、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-1、TNF-α等细胞因子的水平均显著升高（P<0.001）；10 d内病毒高剂量组小鼠死亡率达100%。组织病理检测可见病毒高剂量组小鼠的肝、脾、肺、肾组织有明显损伤。结论： Ad-mIFN-γ体外感染小鼠原代腹腔巨噬细胞后，可以快速分泌mIFN-γ；腹腔注射高剂量（2×107 PFU/只）Ad-mIFN-γ导致小鼠出现CRS典型表现，可作为CAR-T细胞治疗诱发CRS的动物模型。

[摘 要] 目的：评价肿瘤特异性个体化多靶点树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的临床疗效和安全性。方法：回顾性分析2019年10月1日至2022年10月31日东部战区总医院生物治疗科行肿瘤特异性个体化多靶点DC-CIK治疗晚期NSCLC患者的临床资料。统计NSCLC患者的临床疗效和不良反应，分析治疗前后血清中肿瘤标志物的变化，FCM检测患者治疗前后的淋巴细胞亚群和各种细胞因子的表达情况，用质谱仪检测治疗前后靶点的变化。结果: 共入组52例晚期NSCLC患者，其中女性21例、男性31例；年龄32~71岁，平均年龄（50.97±10.72）岁，中位年龄47.5岁。经DC-CIK治疗后，CR 0例，PR 0例，SD 27例，PD 25例。与治疗前比较，DC-CIK治疗后：（1）CEA和CYFRA21-1水平无显著改变，CA125水平显著低于治疗前（P<0.01）；（2）治疗后患者淋巴细胞亚群无显著变化；（3）治疗后患者外周血IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α水平显著升高（均P<0.01），IL-6、IL-10及IL-17水平无明显变化；（4）治疗后靶点数下降明显。DC-CIK治疗过程中无严重不良反应发生。结论: 晚期NSCLC患者行肿瘤特异性个体化多靶点自体DC-CIK治疗是安全的，能使患者产生抗肿瘤免疫反应并得到一定的临床获益。

[摘 要] 目的：通过构建表达IL-12的小鼠CAR-T细胞，探讨经尾静脉将其输注于小鼠体内建立细胞因子释放综合征（CRS）模型的方法。方法：构建基于靶向鼠源CD19的CAR分子，包装逆转录病毒载体并感染小鼠T细胞构建mCD19-CAR-T、mCD19/IL-12-CAR-T细胞。通过构建小鼠体内胰腺癌Panc02-CD19细胞移植瘤模型，检测mCD19/IL-12-CAR-T细胞的抗肿瘤活性，ELISA法检测两种CAR-T细胞IL-12和IFN-γ分泌水平；经小鼠尾静脉输注mCD19/IL-12-CAR-T 细胞构建CAR-T细胞CRS小鼠模型，流式细胞术检测小鼠血清中IL-6、MCP-1、IL-1、IL-10、TNF-α、IFN-γ等细胞因子的含量，H-E染色法观察荷瘤小鼠肝、脾、肺和肾的病理组织学变化。结果：经过培养扩增的mCD19/IL-12-CAR-T细胞能有效分泌IL-12，CAR阳性率达（56.9±5.4）%；与非靶细胞Panc02或靶细胞Panc02-CD19共培养时，均能高分泌IFN-γ。成功构建小鼠胰腺癌Panc02-CD19细胞移植瘤模型，经小鼠尾静脉注射1×106个mCD19/IL-12-CAR-T细胞能显著抑制移植瘤的生长，但未能诱发严重CRS；输注2×106个mCD19/IL-12-CAR-T细胞后，小鼠出现体质量减轻、血清炎性因子水平升高、组织损伤，最终导致死亡等一系列典型CRS表现。结论：成功构建IL-12-CAR-T细胞诱发的小鼠CRS模型，其稳定性好、重复性高，具有广泛的应用前景。

[摘 要] 目的：采用生物信息学方法分析E3泛素连接酶（HECW2）在胃腺癌组织中的表达及其临床意义，为寻找胃腺癌诊断和预后生物标志物提供新的线索。方法：用R语言分析HECW2在泛癌中的表达及其与泛癌预后的关系。借助UCSC Xena、HPA、Kaplan-Meier Plotter等数据库分析HECW2在胃腺癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。采用WB法检测中国人胃腺癌组织及其癌旁组织中HECW2蛋白水平以验证数据库中的分析结果。借助TIMER和Cibersort数据库分析HECW2与胃腺癌免疫浸润的关系。通过LinkedOmics数据库对胃腺癌中HECW2进行GO功能分析和KEGG信号通路富集分析及相关性基因分析。结果：生物信息学分析结果表明，33种不同类型肿瘤中，包括胃腺癌在内的12种肿瘤中HECW2呈显著高表达（均P<0.05），WB法结果显示，中国人胃腺癌组织中HECW2也呈显著高表达（P<0.05）。HECW2表达水平越高，胃腺癌患者OS越短，包括CD4+ T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞在内的免疫细胞浸润丰度越高（均P˂0.01）。此外，HECW2相关信号通路主要富集于细胞外基质受体相互作用、黏着斑、细胞黏附和氧化磷酸化等生理病理过程（均P˂0.01）。结论：HECW2在胃腺癌组织中呈显著高表达且其与胃腺癌预后不良和免疫细胞浸润密切相关，有成为胃腺癌预后标志物和治疗靶点的潜力。

A sample preparation method was developed to simulate the process of intracellular metabolites metabonomics analysis of Escherichia coli. The Escherichia coli cell was firstly quenched with cold sodium chloride solution ( 0. 85 %，precooled at -80℃ for 15 min).The quenched bacterial cell was treated by using the technique of vacuum freeze-drying and liquid nitrogen freezing combined with ultrasonic processing to increase cell membrane penetrability. Finally，a cold aqueous solution of methanol (MeOH:H2O, 1:1，V/ V, 4 ℃) was used as extraction solvent to extract metabolites. In the present research，flow cytometry and OD value recovery were performed to evaluate the degree of cell damage caused by quenching at single cell level and at integral level respectively. The tested results indicated that the degree of damage to cells caused by cold sodium chloride solution was less than 5%. The peak quantity and the total ion intensity detected by LC-TOF in low collision energy were used to evaluate extraction effects. Three different cell membrane penetrability modes and 4 kinds of extraction solvents were investigated and compared.The results showed that the technique of liquid nitrogen freezing combined with ultrasonic processing for cell membrane penetrability and a cold aqueous solution of methanol (MeOH/H2O，1:1，V/V, 4℃) for extraction of metabolites had the best extraction effect(peak quantity was greater than or equal to 105，and total ion intensity was in the range of 106-107).Therefore，in this work，the freeze drying，grinding with liquid nitrogen and ultrasonic extraction were combined to extract metabolites. In this way，it effectively promoted cell lysis and improved the efficiency of extraction. The result of synthetic analysis showed that the method proposed here could meet the requirements of the metabonomics analysis of Escherachaa coli.

Objective Veratraldehyde is an important pharmaceutical intermediate and chemical raw material. Taking common synthetic methods of Veratraldehyde into consideration, the study is aimed to further investigate a more efficient synthetic route in order to provide a solid foundation for the application of Veratraldehyde.Methods This article introduces an alternative method based on the Triton－B catalyzed olefin isomerization of methyl Eugenol followed by ozonation/reduction reaction.Results In the experiment,the optimal conditions was selected by investigating the influence of reaction time, reaction temperature and catalyst dosage on the yield of Veratraldehyde. The total yield of this 2－step reactions was 64% . Conclusion The above－mentioned synthesis method only requires raw materials that are easily acquired and its relative reaction conditions are mild, thus it will provide values in the industrial applications.