[摘 要] 目的：基于生物信息学分析和体内、体外实验研究长链非编码RNA00511（LINC00511）敲减对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭等恶性生物学行为的影响，并初步探究其作用机制。方法：通过基因表达谱交互分析（GEPIA）数据库分析LINC00511在非小细胞肺癌的表达水平，及其与患者肿瘤分期、生存期等临床特征、肿瘤细胞恶性生物学行为有关基因的相关性；利用shRNA慢病毒载体构建LINC00511敲减的H1299肺癌细胞株，克隆形成实验、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测对H1299细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡能力的影响，qRT-PCR检测相关调控基因表达，WB法检测肿瘤相关蛋白的表达；构建裸鼠皮下移植瘤模型，取瘤组织进行免疫组织化学实验检测Ki67表达情况。结果：GEPIA数据库分析表明LINC00511在非小细胞肺癌组织中表达水平升高，且与该病的临床分期情况相关（P < 0.05），LINC00511与肺癌中CASP3、CCNB1、CDK4等多种基因表达均有相关性（P < 0.01）；LINC00511敲减可抑制细胞的克隆形成和迁移能力、促进肺癌细胞凋亡并影响细胞周期进展（P < 0.05，P < 0.01）；LINC00511敲减可下调肺癌细胞CCNB、CDK4、TGF-β1基因的表达（P < 0.01），对CCND1、VEGFA基因表达无明显影响，LINC00511敲减可抑制细胞内MMP9、CTNNB1表达，上调CASP3的表达（P < 0.05，P < 0.01）；裸鼠体内实验证实，LINC00511敲减可抑制移植瘤体组织内Ki67的表达（P < 0.01）。结论：LINC00511在非小细胞肺癌组织中呈高表达，与肺癌临床分期和多种基因表达具有相关性，LINC00511敲减可能通过影响相关基因、蛋白的表达，抑制肺癌H1299细胞的恶性生物学行为。

[摘 要] 目的：为解决野生型B细胞成熟抗原（BCMA）被γ分泌酶切割导致表达不稳定的问题，构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体并构建靶细胞，用于评价BCMA CAR-T细胞的杀伤功能。方法：将野生型BCMA的穿膜域替换为人CD8α穿膜域，构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体（BCMA-CD8α TM），构建过表达该突变体的U266（U266BCMA Mut）、K562（K562BCMA Mut）、SKOV3（SKOV3BCMA Mut）和CHO（CHOBCMA Mut）细胞；构建装载NFAT-EGFP报告基因的BCMA CAR Jurkat细胞（BCMA-CAR-Jurkat-Reporter）与U266BCMA Mut细胞共培养，采用FCM检测该细胞中EGFP表达水平以指示NFAT激活水平，荧光素酶法检测BCMA CAR-T细胞对Luciferase标记的K562BCMA Mut细胞的杀伤作用，实时无标记动态细胞分析技术（RTCA）检测BCMA CAR-T细胞对SKOV3BCMA Mut和CHOBCMA Mut细胞的杀伤作用。结果：应用γ分泌酶抑制剂LY411575抑制γ分泌酶活性，显著增强野生型U266细胞表面BCMA表达水平，平均荧光强度上调10倍以上；但撤除抑制剂后BCMA表达水平逐渐降低（P<0.01）；BCMA-CD8α TM突变体可抵抗γ分泌酶的切割作用，在U266细胞表面稳定表达（P>0.05）；U266细胞及过表达BCMA-CD8α TM的U266细胞与BCMA-CAR-Jurkat-Reporter细胞共培养后都可激活Reporter系统、增强EGFP表达，但该效应在BCMA-CD8α TM过表达的U266细胞中更显著（P<0.01）；BCMA-CD8α TM在BCMA表达阴性的K562、SKOV3和CHO 3种靶细胞中成功过表达，且在LY411575处理下该突变体的表达水平仅有小幅度升高；荧光素酶法检测结果显示，不同效靶比下，BCMA CAR-T细胞均可特异、高效杀伤过表达BCMA-CD8α TM的K562细胞；RTCA结果显示，不同效靶比下，BCMA CAR-T细胞均可有效识别、杀伤过表达BCMA-CD8α TM的SKOV3和CHO细胞，但同等效靶比下的Mock-T细胞无此效应。结论：本实验构建的BCMA-CD8α TM突变体能够抵抗γ分泌酶的切割，在多种靶细胞表面稳定表达，为评价BCMA CAR-T细胞体外杀伤的有效性和特异性提供多种检测手段。