[摘 要] 目的：建立一种以乙型肝炎病毒核心蛋白（HBc）病毒样颗粒（VLP）为骨架，嵌合PD-1 B细胞表位的重组颗粒蛋白，研究其对小鼠结直肠癌（CRC）的抑制效果。方法：设计PD-1 HBc VLP质粒并导入BL21（DE3）获得重组PD-1 HBc VLP表达菌株后，通过优化培养温度，实现蛋白可溶性表达，经硫酸铵沉淀、Sepharose 4 Fast Flow尺寸排阻层析和DEAE阴离子树脂层析纯化获得高纯度的PD-1 HBc VLP。采用电泳、WB、HPLC及电镜手段对其表达水平、蛋白纯度、颗粒形成率、形态特征及抗原结合活性等特征进行系统表征，ELISA测定免疫小鼠后的血清效价，评价其免疫原性，构建CT26细胞CRC小鼠移植瘤模型，通过监测PD-1 HBc VLP治疗后小鼠体质量和肿瘤体积变化，评估PD-1 HBc VLP抗肿瘤活性。结果：在28 ℃条件下，可溶性目的蛋白表达量占总蛋白的10.27%，多步纯化后目的蛋白纯度为（91.77 ± 0.62）%，分子量为23 000，电镜测定粒径为（31.90 ± 1.88） nm，粒径仪测定粒径为（30.66 ± 0.62） nm，多分散指数（PDI）为（0.18 ± 0.05）。WB结果显示，PD-1 HBc VLP重组蛋白可分别与HBc VLP抗血清和PD-1抗体结合。ELISA结果显示，经PD-1 HBc VLP 3次免疫后，第14天小鼠血清中总抗体效价为1∶640 000，其中抗PD-1的效价为1∶40 000。抗肿瘤实验表明，PD-1 HBc VLP组小鼠的肿瘤抑制率为（27.99 ± 2.98）%，对照组在45 d全部死亡，PD-1 HBc VLP组中位生存期延长20 d。结论：成功制备了以HBc VLP为骨架，嵌合PD-1 B细胞表位的PD-1 HBc VLP，且对小鼠结直肠癌有治疗效果。
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