Optimization of Siglec‑6‑targeted CAR‑T cells in vitro and preclinical assessment for the treatment of acute myeloid leukemia
DOI：10.3872/j.issn.1007-385X.2026.07.002
- VernacularTitle:靶向Siglec-6 CAR-T细胞的体外优化及其抗急性髓系白血病的临床前评价
- Author:
Hu Yanmengzi1
1
,
2
,
3
;
Li Zihan2
1
,
2
,
3
;
Guan Zhangchun3
1
,
2
,
3
;
Liu Dan1,2
1
,
2
,
3
;
Shi Ming1
1
,
2
,
3
Author Information
1. School of Cell Therapy and Pharmaceutical Industry, Xuzhou Medical University, Xuzhou 221004, Jiangsu, China;
2. Clinical Oncology Center, The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou 221004, Jiangsu, China;
3. Jiangsu Provincial Collaborative Innovation Center for Tumor Biotherapy, Xuzhou 221004, Jiangsu, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
急性髓系白血病；CAR-T细胞；唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素6；4-1BB
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2026;33(7):719-730
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：构建并优化靶向唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素6（Siglec-6）的CAR-T细胞，评价其对急性髓系白血病（AML）细胞的靶向杀伤作用、初步体内疗效及短期安全性，为Siglec-6作为AML免疫治疗靶点提供实验依据。方法：设计靶向Siglec-6的CAR重组基因，筛选3种人源化scFv，并在二代CAR架构下比较4-1BB、CD28、ICOS、HVEM、TMIGD2和OX40等共刺激结构域对CAR-T细胞功能的影响。采用慢病毒转导人原代T细胞制备Siglec-6 CAR-T细胞，流式细胞术检测CAR阳性率及细胞表型。检测U937、MV4-11和K562细胞表面Siglec-6表达，并构建293T-Siglec-6过表达（OE）细胞、U937-Siglec-6敲除（KO）细胞及U937-Luc/U937-Siglec-6 KO-Luc细胞模型。采用流式杀伤实验、ELISA、实时无标记细胞分析（RTCA）及萤光素酶生物发光法评价CAR-T细胞的体外杀伤活性与靶点特异性；建立U937-Luc异种移植白血病模型，评价其体内抗肿瘤效应，并结合体质量、活体成像、外周血T细胞水平、主要器官H-E染色、器官指数及血清生化指标进行短期安全性评估。结果：3种候选CAR-T细胞中，CAR-T-1在CAR表达水平、短期杀伤活性及后续构建可行性方面表现较优。不同共刺激结构域比较显示，4-1BB-CAR-T细胞CAR阳性率较稳定，并在多种效靶比条件下表现出较强体外杀伤活性。Siglec-6 CAR-T细胞可有效杀伤Siglec-6阳性U937和MV4-11细胞，并显著促进IFN-γ和TNF-α释放（P < 0.000 1），而对Siglec-6阴性K562细胞无明显杀伤作用。293T-Siglec-6过表达模型和U937-Siglec-6 KO模型进一步证实，该杀伤效应具有明确的Siglec-6靶点依赖性。抗原刺激后，Siglec-6 CAR-T细胞向效应表型分化并显著活化（P < 0.000 1），并伴随部分耗竭相关标志物表达水平升高（P < 0.01）。体内实验显示，Siglec-6 CAR-T治疗可降低U937-Luc荷瘤小鼠肿瘤负荷并延长生存期；短期观察中，两组小鼠体质量变化无明显差异，主要器官H-E染色未见明显形态学损伤，部分器官指数及血清生化指标存在组间差异（P < 0.01）。结论：Siglec-6 CAR-T细胞可特异性杀伤Siglec-6阳性AML细胞，并在AML异种移植模型中发挥初步抗白血病作用，其机制可能与Siglec-6靶点依赖性识别、CAR-T细胞活化及IFN-γ/TNF-α分泌水平增加有关。
- Full text:202608190848092527720260702.pdf
