Preparation and activity identification of hepatitis B core protein virus-like particles containing PD-1 B cell epitopes
- VernacularTitle:含PD-1 B细胞表位的乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒的制备及其抗结肠癌活性
- Author:
XIE Nuotong1,2
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CAO Xinyu1,3
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ZHOU Li4
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LI Yulin1
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ZHANG Nan5
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ZHANG Xinwei3
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WANG Yunlong1,3
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Author Information
- Publication Type:Journal Article
- Keywords: PD-1；病毒样颗粒；结直肠癌；B细胞表位；乙型肝炎病毒核心蛋白
- From: Chinese Journal of Cancer Biotherapy 2026;33(2):140-146
- CountryChina
- Language:Chinese
- Abstract: [摘 要] 目的：建立一种以乙型肝炎病毒核心蛋白（HBc）病毒样颗粒（VLP）为骨架，嵌合PD-1 B细胞表位的重组颗粒蛋白，研究其对小鼠结直肠癌（CRC）的抑制效果。方法：设计PD-1 HBc VLP质粒并导入BL21（DE3）获得重组PD-1 HBc VLP表达菌株后，通过优化培养温度，实现蛋白可溶性表达，经硫酸铵沉淀、Sepharose 4 Fast Flow尺寸排阻层析和DEAE阴离子树脂层析纯化获得高纯度的PD-1 HBc VLP。采用电泳、WB、HPLC及电镜手段对其表达水平、蛋白纯度、颗粒形成率、形态特征及抗原结合活性等特征进行系统表征，ELISA测定免疫小鼠后的血清效价，评价其免疫原性，构建CT26细胞CRC小鼠移植瘤模型，通过监测PD-1 HBc VLP治疗后小鼠体质量和肿瘤体积变化，评估PD-1 HBc VLP抗肿瘤活性。结果：在28 ℃条件下，可溶性目的蛋白表达量占总蛋白的10.27%，多步纯化后目的蛋白纯度为（91.77 ± 0.62）%，分子量为23 000，电镜测定粒径为（31.90 ± 1.88） nm，粒径仪测定粒径为（30.66 ± 0.62） nm，多分散指数（PDI）为（0.18 ± 0.05）。WB结果显示，PD-1 HBc VLP重组蛋白可分别与HBc VLP抗血清和PD-1抗体结合。ELISA结果显示，经PD-1 HBc VLP 3次免疫后，第14天小鼠血清中总抗体效价为1∶640 000，其中抗PD-1的效价为1∶40 000。抗肿瘤实验表明，PD-1 HBc VLP组小鼠的肿瘤抑制率为（27.99 ± 2.98）%，对照组在45 d全部死亡，PD-1 HBc VLP组中位生存期延长20 d。结论：成功制备了以HBc VLP为骨架，嵌合PD-1 B细胞表位的PD-1 HBc VLP，且对小鼠结直肠癌有治疗效果。
- Full text:20260402081929703220260204.pdf
