DNMT1 promotes the proliferation and migration of colorectal cancer HCT8 cells by suppressing TRAF6-mediated ubiquitination of EZH2
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2026.01.004
- VernacularTitle:DNMT1通过抑制TRAF6介导的EZH2泛素化促进结直肠癌HCT8细胞增殖与迁移
- Author:
PENG Xiaomei1
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LUO Shunyuan2
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SHI Xinpeng3
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ZUO Haojian3
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CAO Luyang1
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CHEN Han3
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ZHOU Haitao4
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LUO Xiaoyong1，3
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Author Information
1. Luoyang Cancer Disease Clinical Diagnosis and Treatment Research Center, Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University, Luoyang 471000, Henan, China;
2. Health Check-up Center, Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University, Luoyang 471000, Henan, China;
3. Department of Radiotherapy, Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University, Luoyang 471000, Henan, China;
4. Central Laboratory, Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University, Luoyang 471000, Henan, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
DNA甲基转移酶1；结直肠癌；HCT8细胞；增殖；迁移；肿瘤坏死因子受体相关因子6；zeste基因增强子同源物2
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2026;33(1):28-36
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）通过稳定zeste基因增强子同源物2（EZH2）促进结直肠癌（CRC）HCT8细胞增殖与迁移的机制。方法：利用生物信息学方法分析DNMT1在CRC组织中的表达水平。WB法检测DNMT1在CRC细胞HCT8、SW620和正常结肠上皮细胞NCM460中的表达。通过siRNA或慢病毒载体转染HCT8细胞，分为siNC组、siDNMT1组、Vector组、DNMT1-OE组、siTRAF6组、siEZH2组、siEZH2 + DNMT1-OE组。采用克隆形成实验、CCK-8法、Transwell实验和划痕愈合实验检测敲低或过表达DNMT1对HCT8细胞增殖与迁移的影响，WB和qPCR法检测EZH2蛋白和mRNA水平，免疫沉淀（IP）法检测EZH2泛素化水平，免疫荧光双染检测肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）与EZH2的细胞内共定位情况，克隆形成和划痕愈合实验验证EZH2对DNMT1功能的逆转作用。收集2022—2025年间郑州大学附属洛阳中心医院手术切除的12例CRC患者的癌及癌旁组织标本，采用免疫组化法检测CRC组织中DNMT1、TRAF6和EZH2的表达水平。结果：DNMT1在CRC组织中表达显著高于癌旁组织（P < 0.01），且在CRC细胞中表达上调（P < 0.05）；DNMT1敲低显著抑制HCT8细胞增殖及迁移（均P < 0.01），过表达则相反（均P < 0.01）。DNMT1正向调控EZH2的蛋白水平（P < 0.01），而mRNA水平不变（P > 0.05）。MG132可恢复siDNMT1组的EZH2蛋白表达（P < 0.01），且siDNMT1组EZH2泛素化水平升高。DNMT1负向调控TRAF6的表达（P < 0.01），且TRAF6与EZH2在细胞质中共定位，IP证实两者直接结合。敲低TRAF6可减弱EZH2的泛素化水平，敲低EZH2可逆转DNMT1对HCT8细胞增殖、迁移的促进作用（均P < 0.01）。DNMT1和EZH2在CRC组织中呈高表达（P < 0.01），TRAF6在CRC组织中表达显著低于癌旁组织（P < 0.05）。结论：DNMT1通过抑制TRAF6稳定EZH2促进CRC细胞的增殖和迁移，DNMT1、TRAF6和EZH2可能是CRC治疗的潜在靶点。
- Full text:20260313101949689420260104.pdf
