[摘 要] 目的：利用昆虫杆状病毒表达系统（昆虫BEVS）表达糖酵解酶α-烯醇化酶（ENO1）及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法：利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM1载体，获得含有目的基因的重组质粒pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活性位点，进行优化后将其插入pFastBacTM1载体，获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3，利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结果：成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3，获得大小约2 000 bp的基因片段，与预期大小相符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，其分子量约为52 000，与预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论：通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，这些蛋白具有反应原性，为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。
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