[摘 要] 目的：制备低亲和力的CD117 CAR-T细胞，探讨其对急性髓系白血病（AML）细胞Kasumi-1的体外杀伤效应。方法：调取CD117低亲和力抗体巴佐利单抗（barzolvolimab）和Fab-79D VH和VL序列，设计VH-(G4S)3-VL结构的单链抗体，分别构建带4-1BB共刺激分子的经典二代CAR分子，经基因合成后分别亚克隆至pMFG逆转录病毒载体，获得CD117-79D CAR和CD117-0159 CAR质粒。将两种CAR质粒分别包装制备逆转录病毒，检测其滴度合格后转导活化后的T细胞，构建CD117-79D CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞，采用流式细胞术检测两种CAR-T细胞的阳性率。将未转导T细胞与两种CAR-T细胞分别与CD117+ Kasumi-1细胞共培养，通过流式细胞术检测Kasumi-1细胞凋亡率，以评估两种CAR-T细胞的抗肿瘤活性。结果：成功构建CD117-79D CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞，其阳性率分别为（59.4 ± 2.6）%、（62.5 ± 1.2）%。未转导T细胞、CD117-79D CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞体外培养均能稳定增殖，且三者的增殖能力均无显著差异（均P > 0.05）。体外杀伤Kasumi-1细胞结果显示，不同效靶比条件下，CD117-79D CAR-T和 CD117-0159 CAR-T细胞较未转导T细胞展现出显著增强的杀伤能力（P < 0.05或P < 0.01），但两种CAR-T细胞的杀伤效率无显著差异（P > 0.05）。结论：成功构建低亲和力的CD117-79 CAR-T和CD117-0159 CAR-T细胞，体外实验证实其可有效杀伤CD117+ Kasumi-1细胞，为AML的靶向治疗提供了实验依据。

[摘 要] 目的：探究银杏内酯B（GKB）调控蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）/转录激活子4（ATF4）/C/EBP同源蛋白（CHOP）信号通路对肝癌细胞增殖、迁移、凋亡和上皮间质转化（EMT）的影响。方法：将人肝癌细胞MHCC-97H随机分为对照组、GKB组、GSK2656157（PERK抑制剂）组和GKB + GSK2656157组，以GKB和GSK2656157分别干预后，采用MTT法和EdU染色检测各组细胞的增殖活性及增殖率，划痕愈合实验、流式细胞术分别检测各组细胞的迁移及凋亡水平，WB法检测各组细胞中EMT和PERK/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白的表达水平。构建MHCC-97H细胞裸鼠移植瘤模型，以同法分组及药物干预后测定各组移植瘤体积，采用免疫组化、TUNEL染色分别检测各组肿瘤细胞增殖、凋亡水平，WB法检测各组移植瘤组织中EMT和PERK/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白的表达水平。结果：与对照组比较，GKB组细胞活性、增殖率、迁移率、移植瘤体积、Ki-67阳性细胞率、MMP2、N-cadherin与MMP9蛋白表达均显著降低（均P < 0.05），细胞凋亡率、TUNEL阳性细胞率、p-PERK/PERK与E-cadherin、ATF4、CHOP蛋白表达均显著升高（均P < 0.05）；GSK2656157组各指标变化与GKB组相反（均P < 0.05）。与GKB组比较，GKB + GSK2656157组细胞活性、增殖率、迁移率、移植瘤体积、Ki-67阳性细胞率、MMP2、N-cadherin与MMP9蛋白表达均显著升高（均P < 0.05），细胞凋亡率、TUNEL阳性细胞率、p-PERK/PERK与E-cadherin、ATF4、CHOP蛋白表达均显著降低（均P < 0.05）。结论：GKB可通过激活PERK/ATF4/CHOP信号通路抑制肝癌MHCC-97H细胞增殖、迁移和EMT并促进其凋亡。

[摘 要] 目的：探讨颗粒酶M（GZMM）对肾透明细胞癌（ccRCC）细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成的影响及相关分子机制。方法: 采用TCGA数据库和免疫组化分析GZMM在ccRCC组织的表达及其与临床病理特征的相关性。采用CCK-8、Transwell、划痕愈合及血管形成实验检测GZMM对ccRCC细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成的影响，采用WB法检测GZMM对VEGF/ERK信号通路的影响。结果: TCGA数据库和免疫组化分析表明，ccRCC组织中GZMM的表达升高（P < 0.01），且与Fuhrman分级和淋巴结转移有关联（均P < 0.05）。GZMM高表达的患者预后不良（P < 0.05），且与FcerⅠ介导的MAPK激活有关联（P < 0.001）。在ccRCC细胞中，干扰GZMM降低ccRCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力，且抑制ERK信号通路（均P < 0.05）；过表达GZMM促进ccRCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力，且激活ERK信号通路（均P < 0.01）。在HUVEC中，分泌型GZMM促进HUVEC的增殖、迁移、小管和血管形成的能力，且激活VEGF/ERK信号通路（均P < 0.05）。此外，U0126抑制p-ERK、MMP2和MMP9的表达（均P < 0.05），但不影响VEGFA和VEGFR2的表达。结论：ccRCC组织中GZMM呈高表达，且与其Fuhrman分级和淋巴结转移有关联，GZMM通过激活VEGF/ERK信号通路促进ccRCC血管生成和侵袭。

[摘 要] 目的：探讨桥接整合因子1（BIN1）在上皮性卵巢癌（EOC）组织中的表达及其临床意义，以及BIN1对EOC细胞A2780增殖、迁移和侵袭的影响。方法：收集2017年7月至2018年1月河北医科大学第四医院手术切除的67例EOC患者的肿瘤组织及同期因其他妇科疾病手术切除的30例非肿瘤患者的卵巢组织（正常对照组）标本。用免疫组织化学染色法检测EOC组织和非肿瘤卵巢组织中BIN1蛋白的表达水平，χ2检验分析BIN1表达与患者临床病理特征之间的关联，Kaplan-Meier法分析BIN1表达与患者的无病生存期（DFS）和总生存期（OS）之间的关系。用qPCR和WB法检测EOC细胞SKOV3、A2780和人卵巢上皮细胞IOSE80中BIN1 mRNA和蛋白的表达水平。利用基因转染技术将BIN1质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1和空载体质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin分别转染到A2780细胞以构建过表达BIN1细胞及其对照，用qPCR和WB法分别检测转染细胞中BIN1 mRNA和蛋白的表达水平，CCK-8、划痕愈合和Transwell实验分别检测过表达BIN1对A2780细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：EOC组织中BIN1阳性表达率显著低于正常卵巢组织（P<0.01）。BIN1表达与EOC患者较晚的术后病理分期、较差的组织学分级、淋巴结转移及腹膜转移存在正向关联（均P<0.05）；BIN1低表达组患者的DFS和OS均短于BIN1高表达组患者（均P<0.05）。SKOV3和A2780细胞中BIN1 mRNA和蛋白的表达水平均显著低于IOSE80细胞（均P<0.01）；过表达BIN1显著抑制A2780细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05或P<0.01）。结论：BIN1在EOC组织和细胞中呈低表达状态，与患者的不良预后有关；过表达BIN1可降低EOC细胞A2780的增殖、迁移和侵袭能力。

[Abstract] Objective: To study the effect and possible mechanism of TGF-β2 on the invasion of glioma stem cells (GSCs). Methods: Tumor tissues of 8 patients with glioblastoma multiforme, who underwent resection at Department of Neurosurgery of the FirstAffiliated Hospital of China Medical University duringApril 2016 toApril 2017, were collected. The primary culture of glioma cells were conducted with trypsin digestion. Partial primary glioma cells were seeded into serum-free DMEM/F12 culture medium containing EGF, bFGF and B27 to obtain suspension of tumor spheres. Immunoflurenscent staining and differentiation assay were used to detect whether the tumor spheres were GSCs. TGF-β2 secretion ability of GSCs was determined by ELISAassay.After transfection of TGF-β2 siRNA, the invasion ability of glioma stem cells was determined by Transwell assay. Western blotting was used to examine the effect of TGF-β2 on expression of matrix metalloproteinases (MMP) in glioma stem cells. Results: The suspended tumor spheres were proved to be GSCs by immunofluorescent staining and differentiation assay; the tumor spheres expressed the marker of GSCs（CD133）and had the ability to multi-differentiate (glia and neuronal cells). Compared with the primary glioma cells, Glioma stem cells exerted significantly improved TGF-β2 secretion ability ([74.13±3.63] vs [46.13±2.61] pg/ml, P<0.05); and TGF-β2 silencing significantly reduced the invasion ability of glioma stem cells ([105.71±8.69] vs [63.67±5.93], P<0.05) and inhibited MMP-2 and MMP-9 expressions. Conclusion: TGF-β2 can promote the invasiveness of glioma stem cells through MMP-2 and MMP-9 pathway.