[摘 要] 目的：探讨shRNA靶向抑制CD38的方法能否增强抗CD38 CAR-T细胞的抗癌功能。方法：构建shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞的CAR分子，利用逆转录病毒载体包装成功后转导人原代T细胞，制备CAR-T细胞。实验分为shRNA1 CD38 CAR-T组、shRNA2 CD38 CAR-T组和对照组（shR-NC-CD38 CAR-T细胞）。采用qPCR法检测CAR-T细胞CD38 mRNA相对表达水平，计算CAR-T细胞培养0～14 d的增殖倍数，CFSE法检测CAR-T细胞与人Burkitt淋巴瘤细胞Raji-luc或人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞RPMI-8226-luc共培养时的增殖情况，荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比（1∶1、1∶2、1∶4、1∶8）时对Raji-luc和RPMI-8226-luc细胞的杀伤效率，ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-8226-luc细胞时上清液中IFN-γ水平，FCM检测CAR-T细胞表面耗竭T细胞生物标志物PD-1的表达水平。结果：shR-NC-CD38 CAR、shRNA1-CD38 CAR和shRNA2-CD38 CAR逆转录病毒载体的滴度均为1´107拷贝/mL，转导T细胞后，shR-NC-CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T细胞的转导效率（CAR的阳性率）分别为60.3%、67.0%和57.4%。与对照组比较，shRNA2-CD38 CAR-T组细胞中CD38 mRNA的表达水平显著降低（P<0.01），显示shRNA-CD38 CAR-T细胞构建成功。shRNA2-CD38 CAR-T组细胞在体外培养增殖能力更强（P<0.05），对2种CD38阳性的肿瘤细胞的杀伤效率更高（均P<0.05）、IFN-γ释放水平更高（均P<0.05）、细胞表面PD-1的表达水平更低（P<0.05）。结论：成功构建一种shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞，其抗癌功能表现出明显的优势。

[摘 要] 目的：探讨基于新型单载体SynNotch系统构建的局部分泌IL-2的CAR-T细胞（Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞）对传统CD19 CAR-T细胞功能的影响。方法：基于本课题组前期构建的单载体SynNotch系统，将CD19特异性FMC63抗体与IL-2表达模块整合，通过自失活逆转录病毒载体转导T细胞制备Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞。诱导验证实验分为Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞组和未转导T细胞组，通过ELISA检测抗原刺激后IL-2分泌水平。采用CFSE染色法检测在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞存在时，CD19 CAR-T细胞与肿瘤Raji-Luc或SW620-CD19-Luc细胞共培养时，IL-2的分泌对CD19 CAR-T细胞增殖的影响。流式细胞术检测CD69表达，观察在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞分泌IL-2的情况下，CD19 CAR-T细胞与Raji-Luc细胞共培养时的激活情况。结果：成功构建自失活逆转录病毒载体Syn.CD19.IL-2 CAR，制备出Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞，病毒滴度 > 1×107拷贝/mL，转导效率达37.1%。抗原刺激后，SynNotch CAR-T细胞IL-2分泌量显著高于未转导T细胞（P < 0.001）。在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞分泌IL-2时，CD19 CAR-T细胞具有更强的增殖能力和更高的活化水平（均P < 0.001）。结论：成功构建的Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞能显著增强CD19 CAR-T细胞的增殖和活化能力。