[摘 要] 目的：本研究利用单细胞RNA测序分析技术（scRNA-seq）初步探索乳腺癌4T1细胞表达淋巴细胞抗原6复合物E（Ly6E）调控肿瘤免疫微环境（TIME）的潜在机制。方法：利用CRISPR-Cas9技术构建Ly6e基因敲除小鼠乳腺癌4T1细胞（Ly6E-KO），观察其和野生型细胞（Ly6E-WT）体外增殖和体内生长能力的差异。流式细胞术分选两类肿瘤组织中的CD45阳性细胞，再进行scRNA-seq分析。对于测序结果，首先利用Seurat软件包筛选差异表达基因谱，根据标记基因进行注释；再利用Cellchat和Monocle2软件分析细胞互作关系和特定免疫细胞的演化轨迹。结果：与Ly6E-WT相比，Ly6E-KO体外增殖能力无显著差异，但体内生长能力显著降低（P<0.001）。ScRNA-seq分析显示，Ly6E-KO移植瘤浸润DC比例显著高于Ly6E-WT，且DC处于更加活跃的增殖和分裂状态；三种DC亚群（pDC、cDC1和cDC3）与T细胞均存在显著的互作关系。同时发现，Ly6E-KO肿瘤中浸润T淋巴细胞增殖、活化及效应相关的基因表达水平均升高，提示Ly6E-KO具有更强抗肿瘤能力。最后，本研究对人类乳腺癌队列的scRNA-seq数据进行了分析，进一步证实了上述发现。结论：肿瘤细胞Ly6e基因敲除后可通过增加TIME中DC活化及浸润，继而增强机体抗肿瘤免疫应答。
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