[摘 要] 目的:探讨基于新型单载体SynNotch系统构建的局部分泌IL-2的CAR-T细胞(Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞)对传统CD19 CAR-T细胞功能的影响。方法:基于本课题组前期构建的单载体SynNotch系统,将CD19特异性FMC63抗体与IL-2表达模块整合,通过自失活逆转录病毒载体转导T细胞制备Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞。诱导验证实验分为Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞组和未转导T细胞组,通过ELISA检测抗原刺激后IL-2分泌水平。采用CFSE染色法检测在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞存在时,CD19 CAR-T细胞与肿瘤Raji-Luc或SW620-CD19-Luc细胞共培养时,IL-2的分泌对CD19 CAR-T细胞增殖的影响。流式细胞术检测CD69表达,观察在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞分泌IL-2的情况下,CD19 CAR-T细胞与Raji-Luc细胞共培养时的激活情况。结果:成功构建自失活逆转录病毒载体Syn.CD19.IL-2 CAR,制备出Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞,病毒滴度 > 1×107拷贝/mL,转导效率达37.1%。抗原刺激后,SynNotch CAR-T细胞IL-2分泌量显著高于未转导T细胞(P < 0.001)。在Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞分泌IL-2时,CD19 CAR-T细胞具有更强的增殖能力和更高的活化水平(均P < 0.001)。结论:成功构建的Syn.CD19.IL-2 CAR-T细胞能显著增强CD19 CAR-T细胞的增殖和活化能力。