Preparetion of anti-CD70 nanobody immunotoxin fused with PE38 and its killing effect on renal clear cell carcinoma 786-O cells
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2023.08.003
- VernacularTitle:融合PE38的抗CD70纳米抗体免疫毒素的制备及其对肾透明细胞癌786-O细胞的杀伤作用
- Author:
XU Xinlan
1
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LIU Chang
1
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ZHANG Xin
1
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HU Qianqian
1
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LI Jiangwei
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Author Information
1. Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, Xinjiang, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
CD70；铜绿假单胞杆菌外毒素；纳米抗体；PE38；重组免疫毒素；肾透明细胞癌；786-O细胞；细胞毒性；靶向治疗
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2023;30(8):665-671
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：构建靶向CD70分子的重组免疫毒素，通过表达、纯化制备PE38与抗CD70纳米抗体重组蛋白，体外抗肿瘤实验探究重组蛋白是否对高表达CD70分子的阳性肿瘤细胞具有杀伤活性。方法：通过基因工程手段，将CD70纳米抗体Nb 2B3基因片段通过一个连接子与pET21a-PE38基因片段相连，获得重组表达载体pET21a-Nb 2B3-PE38并转入BL21（DE3）感受态细胞中进行表达、纯化与鉴定。用间接ELISA及FACS法检测Nb 2B3-PE38与CD70分子的结合活性，MTT法检测Nb 2B3-PE38对高表达CD70分子的肾透明细胞癌786-O细胞的体外杀伤活性，Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测Nb 2B3-PE38对786-O细胞凋亡的影响。结果：成功构建抗CD70纳米抗体重组免疫毒素Nb 2B3-PE38，纯化获得纯度>90%的重组蛋白，SDS-PAGE及WB检测结果表明目的蛋白正确表达，分子量为56 000。纯化后的Nb 2B3-PE38能与重组CD70抗原及786-O细胞表面的CD70分子特异性结合；25 µg/mL Nb 2B3-PE38即对786-O细胞产生极显著的杀伤作用（P<0.001），并且促进786-O细胞的细胞凋亡（P<0.01），其杀伤效应强于阳性对照顺铂（P<0.01）。结论：成功制备了特异性靶向CD70分子的免疫毒素Nb 2B3-PE38，其能够有效杀伤786-O细胞并诱导细胞凋亡且效果强于顺铂。
- Full text:20230803.pdf
