miR-216b-5p mediates autophagy to reverses cisplatin resistance of esophageal cancer Eca109 cells by targeting ATG5
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2023.07.002
- VernacularTitle:miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性
- Author:
QIU Shanting
1
,
2
;
LI Xiaoyan
1
,
2
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CHEN Zhecong
1
,
2
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GAO Mengyuan
1
,
2
;
JIN Shuyi
1
,
2
;
CHEN Wenhu
1
,
2
Author Information
1. School of Basic Medical Sciences &
2. Forensic Medicine, Hangzhou Medical College, Hangzhou 310059, Zhejiang, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
食管癌；Eca109/DDP细胞；miR-216b-5p；自噬；增殖；凋亡；顺铂耐药
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2023;30(7):552-559
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：探讨miR-216b-5p对食管癌Eca109细胞顺铂（DDP）耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-216b-5p在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109和耐药细胞Eca109/DDP中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic及mimic NC、自噬相关蛋白5（ATG5）过表达质粒转染到Eca109/DDP细胞中，用CCK-8、EdU法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡；mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况，WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系，WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型，观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果：miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109和Eca109/DDP细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP细胞的增殖并诱导凋亡（均P<0.05），减少细胞中自噬小体数量（P<0.05），下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62蛋白水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达（P<0.05），过表达ATG5可使miR-216b-5p mimic对Eca109/DDP细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱（均P<0.05），自噬相关蛋白P62表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1表达升高（均P<0.05）。荷瘤实验结果表明，miR-216b-5p过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）。结论：miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性，其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。
- Full text:20230702.pdf
