CRISPR/Cas9-mediated endogenous TCR knockout enhances TCR-T cells targeted killing HPV16-positive cervical cancer cells
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2023.05.002
- VernacularTitle:CRISPR/Cas9敲除内源TCR增强TCR-T细胞对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的杀伤
- Author:
FENG Juan
1
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LI Jiatao
1
;
ZHUANG Na
1
Author Information
1. Chongqing Key Laboratory of Translational Research for Cancer Metastasis and Individualized Treatment, Chongqing University Cancer Hospital, Chongqing 400030, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
宫颈癌；SiHa；CRISPR/Cas9；TCR敲除；TCR-T细胞；HPV16
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2023;30(5):373-379
- CountryChina
- Language:Chinese
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Abstract:
[摘 要] 目的：基于CRISPR/Cas9基因编辑技术制备无内源TCR的TCR-T细胞并鉴定其在体外杀伤HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的功能。方法：培养健康志愿者外周血CD8+ T细胞和Jurkat细胞，CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除CD8+ T、Jurkat细胞的TCR基因，制备过表达转基因TCR的重组慢病毒，在敲除内源性TCR的CD8+ T和Jurkat细胞中用慢病毒过表达转基因TCR制备TCR-T细胞，多色FCM检测TCR-T细胞中TCR和CD3的表达水平，荧光素酶活性实验检测TCR-T细胞对HPV16阳性SiHa细胞的杀伤效率。结果：CRIPSR/Cas9基因编辑技术高效地敲除了外周血CD8+ T细胞和Jurkat细胞中的TRAC和TRBC基因，敲除效率分别为（81.4±4.5）%、（98.5±0.07）%，制备的无内源TCR的TCR-T细胞高效表达转基因TCR，在外周血CD8+ T和Jurkat细胞中表达率为（66.0±17.8）%、（97.3±2.6）%，敲除内源TRAC和TRBC基因有效增强CD8+ T和Jurkat细胞膜表达转基因TCR（均P<0.01），敲除内源TCR增强TCR-T细胞特异性杀伤HPV16阳性的SiHa细胞[（71.4±1.0）% vs （35.1±2.0）%，P<0.01）]。结论：无内源TCR的TCR-T细胞显著增强转基因TCR的表达和对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的靶向杀伤能力，为提高TCR-T细胞的临床疗效提供了实验依据。
- Full text:20230502.pdf
