Construction of anti-CD38 CAR-T cells with targeted inhibition of CD38 by shRNA and preliminary identification of its functions
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2022.01.002
- VernacularTitle:shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞构建及其功能的初步鉴定
- Author:
LIU Xiuying1
1
,
2
;
FENG Yaru1
1
,
2
;
ZHOU Yating1
1
,
2
;
WANG Jianxun1,2
1
,
2
Author Information
1. 1. School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China
2. 2. Research Institute of Shenzhen, Beijing University of Chinese Medicine, Shenzhen 518118, Guangdong, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
淋巴瘤；多发性骨髓瘤；CD38；嵌合抗原受体；T细胞；RNA干扰
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2022;29(1):11-17
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：探讨shRNA靶向抑制CD38的方法能否增强抗CD38 CAR-T细胞的抗癌功能。方法：构建shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞的CAR分子，利用逆转录病毒载体包装成功后转导人原代T细胞，制备CAR-T细胞。实验分为shRNA1 CD38 CAR-T组、shRNA2 CD38 CAR-T组和对照组（shR-NC-CD38 CAR-T细胞）。采用qPCR法检测CAR-T细胞CD38 mRNA相对表达水平，计算CAR-T细胞培养0～14 d的增殖倍数，CFSE法检测CAR-T细胞与人Burkitt淋巴瘤细胞Raji-luc或人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞RPMI-8226-luc共培养时的增殖情况，荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比（1∶1、1∶2、1∶4、1∶8）时对Raji-luc和RPMI-8226-luc细胞的杀伤效率，ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-8226-luc细胞时上清液中IFN-γ水平，FCM检测CAR-T细胞表面耗竭T细胞生物标志物PD-1的表达水平。结果：shR-NC-CD38 CAR、shRNA1-CD38 CAR和shRNA2-CD38 CAR逆转录病毒载体的滴度均为1´107拷贝/mL，转导T细胞后，shR-NC-CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T细胞的转导效率（CAR的阳性率）分别为60.3%、67.0%和57.4%。与对照组比较，shRNA2-CD38 CAR-T组细胞中CD38 mRNA的表达水平显著降低（P<0.01），显示shRNA-CD38 CAR-T细胞构建成功。shRNA2-CD38 CAR-T组细胞在体外培养增殖能力更强（P<0.05），对2种CD38阳性的肿瘤细胞的杀伤效率更高（均P<0.05）、IFN-γ释放水平更高（均P<0.05）、细胞表面PD-1的表达水平更低（P<0.05）。结论：成功构建一种shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞，其抗癌功能表现出明显的优势。
- Full text:20220102.pdf
