Effects of TFDP3 knock-out by CRISPR/Cas9 on biological function of prostate cancer PC3 cells
- VernacularTitle:通过 CRISPR/Cas9 技术抑制 TFDP3 基因对前列腺癌 PC3 细胞生物学 功能的影响
- Author:
LI Rui
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YANG Liu
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LI Jinjie
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DIAO Yanjun
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SU Mingquan
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HAO Xiaoke
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LIU Jiayun
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Author Information
- Publication Type:Journal Article
- Keywords: CRISPR/Cas9；TFDP3 基因；前列腺癌；PC3 细胞；细胞周期；凋亡；迁移；侵袭
- From: Chinese Journal of Cancer Biotherapy 2021;28(5):443-450
- CountryChina
- Language:Chinese
- Abstract: 目的：通过 CRISPR/Cas9 技术构建前列腺癌 PC3 细胞 TFDP3 基因敲除的稳转株，探讨抑制 TFDP3 表达对 PC3 细 胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法：通过生物信息学筛选 sgRNA，通过 CRISPR/Cas9 技术、构建抑制 TFDP3 基因表达 的 sgRNA-Cas9 共转染慢病毒，感染 PC3 细胞后筛选获取稳转细胞株。通过流式细胞术对 TFDP3 基因敲除的实验组与空白对照 组进行细胞周期和凋亡检测，并进一步通过划痕实验和 Transwell 实验进行细胞迁移和侵袭能力检测。结果：通过生物信息学 筛选获得 3 条 sgRNA，其中 sgRNA2 有明显的抑制前列腺癌细胞基因表达的功能；通过 CRISPR/Cas9 技术成功构建了基于 CRISPR/Cas9 介导的 TFDP3 低表达的 PC3 细胞稳转株。抑制 TFDP3 基因表达后，相比于对照组，KO 组中 G0/G1 期细胞 百分比增加、G2/M 期细胞百分比下降（P<0.05 或 P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.05），细胞迁移率明显下降 [24 h 迁移率： (44.00±1.60)% vs (65.00±4.40)%，P<0.01]，穿过聚碳酸酯膜的侵袭细胞数明显下降 [（185.89±11.71）vs （248.33±11.95）个， P<0.01]。结论：通过 CRISPR/Cas9 技术抑制 TFDP3 基因表达后，PC3 细胞发生周期阻滞、凋亡率也有所增加、迁移和侵袭能力 显著减弱，提示 TFDP3 是一个前列腺癌促癌基因。
- Full text:20210504.pdf
