FHL2 interacts with LDHA to promote glioma cell proliferation
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2024.10.006
- VernacularTitle:FHL2与LDHA相互作用促进胶质瘤细胞的增殖
- Author:
WU Guoqing
1
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ZHANG Ting△
1
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SONG Xiaofeng
1
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ZHU Ting
1
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LI Na
1
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LI Ming
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Author Information
1. School of Life Science and Biotechnology, Sanquan Medical College of Xinxiang Medical University, Xinxiang 453000, Henan, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
四个半LIM结构域2；乳酸脱氢酶A；胶质瘤；U87细胞；SNB19细胞；增殖
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2024;31(10):976-983
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：探讨四个半LIM结构域2（FHL2）蛋白对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制。方法：利用TCGA和CGGA数据库分析胶质瘤组织中FHL2 mRNA表达水平与患者预后的关系。通过WB法检测人胶质瘤组织标本及人胶质瘤细胞U87、T98G、U251、SNB19、GSC23、A172、LN229、G267和星形胶质细胞NHA中的FHL2蛋白表达水平。利用慢病毒载体构建稳定敲低FHL2的U87细胞和过表达FHL2的SNB19细胞，即U87-shGFP、U87-shFHL2-1#、U87-shFHL2-4#和SNB19-3flag、SNB19-3flag-FHL2组。通过CCK-8法、克隆形成实验检测敲低和过表达FHL2对细胞增殖的影响，免疫共沉淀（Co-IP）和液相色谱-串联质谱（LC/MS）法筛选FHL2在胶质瘤细胞中的相互作用蛋白，并用Co-IP和免疫荧光法验证它们的结合作用和共定位情况。使用酶标仪检测敲低和过表达FHL2细胞内乳酸产量和乳酸脱氢酶（LDH）活性的变化，WB法分析FHL2、LDHA及p-LDHA在正常脑组织和胶质瘤组织中的蛋白表达差异及其相互关系。在过表达 FHL2的SNB19细胞中使用LDHA的小分子抑制剂AT-101，通过CCK-8实验和酶标仪比色法验证FHL2在胶质瘤乳酸代谢中的作用，验证AT-101在胶质瘤中潜在的治疗效果。结果：Co-IP和LC/MS检测发现，FHL2与LDHA在胶质瘤细胞中存在相互作用。FHL2过表达可提高LDHA活性和乳酸生成（均P < 0.001），进而促进胶质瘤细胞增殖（P < 0.001）。相反，敲低FHL2会降低LDHA活性和乳酸产量（P < 0.001或P < 0.05）并抑制细胞增殖（P < 0.001）。AT101能抑制LDHA活性，并显著抑制FHL2促进胶质瘤细胞的增殖，同时恢复磷酸化LDHA（Y10）水平（P<0.01或P < 0.001）。结论：FHL2与LDHA蛋白相互作用，FHL2通过激活p-LDHA（Y10）的表达促进LDHA活性和乳酸产生，进而促进胶质瘤细胞的增殖，靶向这种相互作用可能成为治疗胶质瘤的潜在策略。
- Full text:202410300908305432720241006.pdf
