Expression and characterization of ENO1 protein and its associated active site deletion mutant proteins in a baculovirus expression vector system
DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2024.07.004
- VernacularTitle:ENO1蛋白及其相关活性位点缺失突变蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定ve site deletion mutant proteins in a baculovirus expression vector system
- Author:
DAI Pengyua
1
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2
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YANG Ruia
1
,
2
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ZHANG Tingtinga
1
,
2
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MA Xinyuna
1
,
2
;
LIU Huilingb
1
,
2
Author Information
1. a. Gynecology Ⅱ, First Clinical Medical College
2. b. Gynecology Ⅱ, Gansu Provincial Hospital, Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, Gansu, China
- Publication Type:Journal Article
- Keywords:
α-烯醇化酶；昆虫杆状病毒表达系统；蛋白表达；酶活性位点缺失
- From:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
2024;31(7):669-674
- CountryChina
- Language:Chinese
-
Abstract:
[摘 要] 目的：利用昆虫杆状病毒表达系统（昆虫BEVS）表达糖酵解酶α-烯醇化酶（ENO1）及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法：利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM1载体，获得含有目的基因的重组质粒pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活性位点，进行优化后将其插入pFastBacTM1载体，获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3，利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结果：成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3，获得大小约2 000 bp的基因片段，与预期大小相符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，其分子量约为52 000，与预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论：通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，这些蛋白具有反应原性，为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。
- Full text:20240729085724734820240704.pdf
